技術原理

(10x Genomics單細胞轉錄組為例)
1. 形成GEMs 基于微流控芯片形成油包水(GEMs),每個油包水內含有一個細胞、一個Gel beads 以及逆轉錄需要的引物試劑和酶等,單個GEM內可進行獨立逆轉錄反應互不干擾。
2. 標記細胞和RNA分子 Gel bead上帶有標簽,GEMs進行逆轉錄,可將10x barcode(10x BC,用來標記細胞)、UMI(標記本底RNA進行定量)加在每個mRNA分子上。
3. 巢式PCR富集全長V(D)J序列 基于T細胞和B細胞VDJ序列設計巢式PCR引物,富集全長V(D)J序列
實驗流程

技術優勢
1)可實現成對的重鏈和輕鏈(B細胞)或α和β鏈(T細胞)的全長測序
2)精細到單細胞水平,能獲得大量單細胞的免疫組庫數據
3)同批樣本可同時獲得mRNA表達譜數據和免疫組庫數據