產品描述
CUT&Tag技術的核心是在Tn5上融合了protein A/G抗體結合功能域的轉座體pAG-Tn5。在進行CUT&Tag實驗時,首先進行靶蛋白特異性抗體(一抗)孵育,使抗體進入細胞與靶蛋白結合。為了放大信號,同理接著進行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5轉座體,使得轉座體進入細胞并與抗體結合,這樣就把轉座體間接的固定在靶蛋白上,隨后激活Tn5酶的切割活性,切斷靶蛋白結合的DNA區域。由于Tn5連有測序接頭,在打斷的同時直接在片段化的DNA上加接頭,接著提取DNA,進行PCR擴增構建文庫。
盡管CUT&Tag與ChIP方法在某些方面類似,但CUT&Tag實驗的起始材料是活的可滲透細胞或分離的細胞核,而不是ChIP-seq中使用的甲醛交聯的細胞或組織。CUT&Tag有望將蛋白與染色質DNA互作的研究變成了一種類似PCR反應的常規操作,對基因調控、表觀遺傳等領域的研究具有重要的意義。
產品優勢
更好的信噪比和更低的背景;
樣本起始量低,測序通量高,單堿基分辨率;
檢測整個基因組中的蛋白質/DNA結合和組蛋白修飾位點;
精確定位蛋白質與DNA的結合位點;
靈敏度高,可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有片段;
實驗流程
數據分析
樣本類型 | 建議送樣量 | 存儲介質 | 保存、運輸條件 |
新鮮細胞 | >30w | 有10%FBS的常用培養基 | 碎冰運輸,冰袋運送注意溫度勿過低導致懸液凍結 |
凍存細胞 | >30w | 凍存液(10%DMSO,30%血清(FBS)培養基) | -80℃保存,干冰運輸 |
動物組織 | >30mg | / | -80℃保存,干冰運輸 |
植物組織 | >500mg | / | 預冷的錫箔紙包裹儲存在-80°C,干冰運輸 |
研究方向/思路