技術(shù)原理

技術(shù)原理 SEERNA?ISH RNA熒光原位檢測是基于信號放大的單分子 RNA 熒光原位雜交技術(shù)，通過配對設(shè)計的 DNA 連接探針（DLPs）與靶標(biāo) RNA 分子互補配對結(jié)合，然后使用具有以RNA為模板進行DNA連接能力的連接酶，進行 DLPs 的第一步連接成半環(huán)；之后以互補的 DNA 為模板，在 Splint連接酶的作用下實現(xiàn) DLPs 的成環(huán)；隨后在 DNA 聚合酶的作用下，進行滾環(huán)擴增反應(yīng)實現(xiàn)信號放大；最后在滾環(huán)擴增產(chǎn)物上，雜交帶有單個熒光基團標(biāo)記的檢測探針，進行熒光顯微拍照成像。

實驗流程

（1）樣本前處理

     冰凍樣本：切片退凍、固定、脫水和透化等，以便探針和反應(yīng)所需的酶等成分進入；             

     FFPE樣本：烤片、脫蠟、復(fù)水、固定、復(fù)性、透化和脫水等。 

（2）探針雜交與滾環(huán)擴增：探針與RNA雜交之后連接成環(huán)，通過滾環(huán)擴增放大信號； 

（3）熒光成像：檢測探針攜帶特定熒光基團，與靶標(biāo)基因雜交探針特異性結(jié)合，在顯微鏡下選擇合適的熒光濾塊和曝光時間進行掃描成像，通過識別熒光信號確定該位置靶向結(jié)合的基因； 

（4）圖像分析：在組織圖像中標(biāo)記每個靶基因，可以進行信號點計數(shù)分析。

產(chǎn)品優(yōu)勢

(1) 高效、特異、高敏

(2) 高信噪比

(3) 可實現(xiàn)256種靶標(biāo)分子檢測

(4) 亞細(xì)胞分辨率

技術(shù)優(yōu)勢

產(chǎn)品性能

• 單RNA分子檢測

• 探針設(shè)計特異性強

• 5~10對探針/靶標(biāo)、靈敏度高 

• 信號放大、信噪比高

 熒光通道

• DAPI 通道、GFP/Cy3/Cy3.5/Cy5/Cy7 通道均適用 

• （Alexa Fluor 488/Cy3/Texas Red/Cy5/Alexa Fluor 750）

樣本和靶標(biāo)

靶標(biāo)：同時檢測1~4個靶標(biāo)RNA（mRNA、LncRNA、circRNA、可變剪切等）

樣本：細(xì)胞爬片、新鮮冰凍OCT包埋組織切片（FF） 、福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片和固定后冰凍組織切片

檢測結(jié)果展示

1. 細(xì)胞爬片

2. 新鮮冰凍OCT包埋組織切片（FF） 

3. 福爾 馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片

4. 固定后冰凍組織切片